喷雾干燥机一个地高辛配基

标记 !!光敏生物素（"#$%$&’$%’(）是一种光敏化合物，通过一个连接臂，一端连接生物素，另一端连接化学性质活泼的光敏基团。在强可见光下，光敏基团与核苷酸特定部位共价结合，合成光敏生物素标记探针。 !!（三）地高辛标记物 !!地高辛（)’*$+’*,(’(，-’*）是类固醇半抗原化合物，通过一个 ..个碳原子的交联臂与尿嘧啶核苷酸的嘧啶环上的第 /位碳相连，形成地高辛标记的尿嘧啶核苷酸。地高辛标记的效率高，一般每 01 20/个核苷酸（(%）中就带喷雾干燥机一个地高辛配基，杂交后又有灵敏的免疫酶学检测系统，灵敏度高，有取代生物素标记探针的趋势。 !!（四）分子信标 !!分子信标（3$4,56478 &,75$(）是根据核酸碱基配对原则和荧光共振能量转移现象设计的。分子信标长约 0/ (%，空间结构呈茎环形，其中环序列是和靶核酸互补的探针，茎长 / 29 (%，由与靶序列无关的互补序列构成，茎的一端连上一个荧光分子，另一端连上一个淬灭分子（ :6,(5#,8）。当无靶序列时，分子信标呈茎环结构，荧光分子和淬灭分子非常接近，荧光分子发出的荧光被淬灭分子吸收并以热的形式散发，检测不到荧光信号。当有靶序列存在时，分子信标的环序列和靶序列特异的结合，形成的双链比茎环结构更稳定，荧光分子和淬灭分子分开，荧光分子发出的荧光不被淬灭分子吸收，则可检测到荧光。二、分子杂交的方法 !!分子杂交分为固相杂交、液相杂交和固相液相杂交。

固相液相杂交是把欲检测的核酸样本或探针先结合到固相载体上，再与液体中的探针或核酸样品进行杂交反应，漂洗去除未反应的探针或核酸样品，经检测杂交信号，判断杂交结果。 !!（一）斑点杂交 !!斑点杂交（)$% &4$% #;&8’)’<7%’$(）是将>?或 ->?变性后直接点样在硝酸纤维素膜上，探针放在杂交液内进行杂交。方法简便、快速、灵敏，用于特定基因的定性分析。 ! ! ->?点阵（->? 7887;）是将相关的探针按顺序点在硝酸纤维素膜上，待检样品放在杂交液内，检查样品中的核酸能和哪一个探针杂交。 !!基因芯片（*,(, 5#’"@）是将探针点在硅片上，待测样品放在杂交液内进行杂交，借助计算机判断样品中的核酸能和哪一个探针杂交。 ->?点阵和基因芯片点在固相上的是探针的序列，没有进行标记。待测核酸样品在杂交前进行标记。 !!斑点杂交、 ->?点阵、基因芯片主要是确定待检样品中有没有所要的核酸。 !!（二）原位杂交 !!原位杂交

（’( @’%6 #;&8’)’<7%’$(）是用核酸探针与细胞和组织切片中的核酸进行杂交并对其进行检测>?分子经限制酶切，在琼脂糖凝胶上电泳使 ->?片段依据相对分子质量大小分开，再将电泳结果从凝胶中转印到硝酸纤维素膜上，经固定和变性后，在膜上与探针进行杂交，确定电泳条带中哪一条是所要的 ->?。开始将琼脂糖上的 ->?条带转移到硝酸纤维素膜上，采用的是用吸墨汁纸吸水（&4$%%’(*）的方法（见图 .9 9?）。英国爱丁堡大学的 B)C’( A$6%#,8(博士 第十七章 /基因技术!"!建立了此方法， !"#$%&’(印迹杂交由此得名。现在将 )*+转移到硝酸纤维素膜上多采用转移电泳的方法（见图 ,--.）。图 ,--/ !"#$%&’(印迹杂交 //（0）*"’$%&’(印迹杂交（ ("’$%&’( 12"$$3(4）/ *"’$%&’(印迹杂交是经典的 5*+分析法。操作方法和 !"#$%&’(印迹杂交方法基本相似，是将 5*+经电泳分开后转移到硝酸纤维素膜上进行杂交。 //（6）7&8$&’(印迹杂交（9&8$&’( 12"$$3(4）/ 7&8$&’(印迹杂交是将蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后转移到硝酸纤维素膜上，检测哪一种蛋白质能和抗体反应，也叫免疫印迹技术。第三节 /聚合酶链反应